一病人晨起后用无菌生理盐水漱口，用力深咳，弃去第一口痰，将第二口痰咳入无菌小瓶，1小时内送检。
二痰培养采用血琼脂平板和巧克力平板作培养基，药敏试验采用琼脂扩散法和微量稀释法。
三痰半定量培养以优势菌中度以上生长(≥+++)为阳性致病菌。或菌落计数(CFU)≥105／ml，或3天内2次以上培养到相同的细菌亦认定为阳性致病菌。
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