乳房Paget病肿瘤组织中Bcl－2、Bax、雌激素和孕激素受体表达的研究

2015-09-30 17:19:10

乳房paget病肿瘤组织中bcl－2、bax、雌激素和孕激素受体表达的研究

中华皮肤科杂志 2000年第2期第33卷短篇论著

作者：方红　孙国均　沈奇范

单位：方红　沈奇范（310003　杭州市，浙江大学医学院附属第一医院皮肤科）；孙国均（附属第二医院皮肤科）

　　乳房paget病(mpd)是一种特殊类型的皮肤肿瘤，患者往往合并下方乳腺癌^[1]。近年来，乳腺肿瘤组织中癌基因、抑癌基因以及凋亡相关基因研究报道日益增多，揭示乳腺癌的发生发展涉及到上述基因之间的相互作用^[2]。我们采用sp免疫组化方法，观察bcl－2、bax在mpd及其下方乳腺癌中的表达，并与雌激素受体（er）、孕激素受体（pr）的表达情况进行比较，旨在探讨凋亡相关基因与mpd的发病关系以及mpd与下方乳腺癌之间的关系。

　　一、材料与方法

　　1.标本：mpd患者26例，均为女性，年龄30～77岁，平均诊断年龄56.5岁。左侧乳头及乳晕病变14例，右侧乳头及乳晕病变12例。正常人对照5例，取自成人躯干部,为外科整形切除多余之皮肤标本。

　　2.试剂：第一抗体抗bcl－2（n－19）和抗bax（n－20）抗体为兔抗人多克隆抗体；第一抗体抗er和抗pr抗体为鼠抗人单克隆抗体。所有抗体均为美国santacruz公司产品，购自北京中山生物技术公司。

　　3.标本均经3.33mol/l(10％)中性福尔马林固定，石蜡包埋。连续组织切片厚4μm,分别进行he染色及免疫组化染色。免疫组化步骤：脱蜡至水后加枸橼酸缓冲液10mmol/l（ph6.0）95℃10min，正常羊血清封闭15min，分别加入4种一抗（浓度均为1∶100），室温孵育4h，加生物素－sp标记二抗，室温孵育30min。dab显色，苏木素复染封片。上述各步骤间均用pbs洗涤3次，每次5min。用已知阳性切片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。

　　4.结果判断标准：根据paget细胞及乳腺癌细胞着染数目及染色深浅分别记0～3分。着染细胞数目超过肿瘤细胞数＞50％3分，25％～50％2分，5％～24％1分，＜5％为0分。染色深度以多数细胞的呈色反应为准：深棕色为3分，棕黄色2分，淡棕色1分，不着色0分。上述2项指标积分数分4级：强阳性（＋＋＋）5～6分，阳性（＋＋）3～4分，弱阳性（＋）2分，阴性（－）0分。5.统计学处理：采用计算机spss统计软件包的联列表资料χ²检验法。

　　二、结果

　　1.病理形态：所有病例均在表皮见到典型paget细胞。5例为单纯mpd,21例系mpd合并下方乳腺癌，其中浸润性导管癌10例，单纯癌4例，导管内癌7例。高分化者16例，大多数paget细胞核淡染居中，核浆比例小，分裂象少见，paget细胞呈散在或小巢状分布；低分化者10例，多数paget细胞核深染偏位，细胞呈印戒状，分裂象易见，细胞呈巢或呈腺泡或腺管状结构。

　　2.免疫组化染色结果：bcl－2和bax阳性染色以细胞浆为主，呈棕黄色颗粒着色；er、pr阳性染色为细胞浆及细胞核棕黄色颗粒着色。26例mpd中，bcl－2蛋白表达阳性16例，阳性率为61.5％；bax蛋白表达阳性19例，阳性率为73.1％；er阳性18例，阳性率69.2％；pr阳性17例，阳性率65.4％，详见表1。一些病例paget细胞同时表达2种或2种以上蛋白，paget细胞同时表达bcl－2与bax或er或pr蛋白情况详见表2。

　　21例paget病合并下方乳腺癌，其乳腺癌细胞bcl－2、bax、er和pr的表达阳性率分别为81.0％、85.7％、71.4％和71.4％。

　　正常人皮肤基底细胞可见bcl－2阳性表达，其上方角质形成细胞则呈阴性表达，而bax阳性表达见于表皮上层邻近角质层及角质层。正常皮肤角质形成细胞及大小汗腺均不表达er、pr。

表1bcl－2、bax、雌激素受体和孕激素受体在乳房paget病中的表达

组别	例数	bcl－2	bax	雌激素受	体孕激素受体
-	＋	＋＋	＋＋＋	-	＋	＋＋	＋＋＋	-	＋	＋＋	＋＋＋	-	＋	＋＋	＋＋＋
高分化组	16	3	8	5	0	5	6	4	1	3	11	1	1	4	9	2	1
低分化组	10	7	3	0	0	2	4	4	0	5	3	1	1	5	4	1	0
合计	26	10	11	5	0	7	10	8	1	8	14	2	2	9	13	3	1

表2　乳房paget病中bcl－2分别与bax、雌激素受体、孕激素受体同时表达(％)

组别	例数	bax	雌激素受体	孕激素受体
高分化组	16	10(62.5)	11(68.8)	10(62.5)
低分化组	10	2(20.0)	2(20.0)	2(20.0)
合计	26	12(46.2)	13(50.0)	12(46.2)

　　三、讨论　　本文结果与文献报道乳腺癌的表达结果相类似。乳腺癌细胞bcl－2表达与预后好的临床及组织学指标呈正相关。而bax的表达则与肿瘤组织学分型、分级、er、pr等无关^[3，4]。研究显示，乳腺癌细胞同时表达bcl－2与bax和细胞的分化程度呈正相关^[4]。二者同时表达阳性提示乳腺癌细胞凋亡调控机制障碍轻，增殖力和侵袭力弱，细胞分化好，因而患者预后好。

　　合并乳腺癌的21例mpd中，其下方乳腺癌细胞的bcl－2表达大多与表皮paget细胞的表达相对应，12例paget细胞与乳腺癌细胞均为阳性表达，3例均呈阴性表达，符合率达71.4％。乳腺癌细胞的er、pr表达则与paget细胞的表达呈高度一致。二者均表达er、pr的有14例，均不表达的有6例，符合率达95.2％，仅1例paget细胞的er、pr表达阴性，而乳腺癌细胞er表达阳性，pr表达弱阳性。正常皮肤组织中，不论角质形成细胞及大小汗腺均无er、pr表达。上述结果强烈提示paget细胞与乳腺癌细胞具有共同的生物学特性。另外，我们在一些组织切片中也发现，乳腺癌细胞与表皮paget细胞呈连续移行状态。因此，我们认为，大部分mpd表皮paget细胞源自于乳腺癌细胞，小部分不合并乳腺癌的mpd或paget细胞与乳腺癌细胞凋亡相关基因表达不一致的mpd,其paget细胞可能来源于表皮原始干细胞，有待进一步研究。

　　文献报道^[5，6]，乳腺癌中bcl－2表达与er、pr表达呈正相关，提示乳腺癌中bcl－2受雌激素调节。本文的结果表明paget细胞的bcl－2表达与er或pr表达亦呈一定的相关性，高分化组同时表达阳性率高于低分化组，我们认为mpd可能亦属于激素依赖性肿瘤，对于er或pr表达阳性的患者，如同乳腺癌患者一样，使用抗雌激素辅助治疗或内分泌治疗是否会有良好的前景，值得进一步探讨。

　　参考文献

　　1．vielh p,validire p,kheirallah s. paget′ disease of the nipple without clinically and radiologically detectable breast tumor. pathol res pract, 1993,189:150－ 155.

　　2．gee jmw, robertson jfr, ellis io， et al. immunocytochemical localization of bcl－ 2 protein in human breast cancers and its relationship to a series of prognostic markers and response to endocarine therapy. int j cancer,1994,59:619－ 628.

　　3．berardo md, elledge rm, moor cd,et al. bcl－ 2 and apoptosis in lymph node positive breast carcinoma. cancer, 1998,82:1296－ 1302.

　　4．陈丽荣，张苏展，王海军，等.凋亡相关基因在乳腺癌的表达及其预后的关系.中国癌症杂志，1998， 8:160－ 162.

　　5．bhargava v, kell dl, van de rijn m， et al. bcl－ 2 immunoreactivity in breast carcinoma correlates with hormone receptor positivity. am j pathol, 1994,145:535－ 540.

　　6．gasparini g, barbareschi m, doglioni c, et al. expression of bcl－ 2 protein predicts efficacy of adjuvant treatments in operable node positive breast cancer. clin cancer res,1995, 1:189－ 198.

收稿日期：1999－05－17