系统性红斑狼疮患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测
中华皮肤科杂志 1999年第4期第32卷 短篇论著
作者：孟庆功 袁国华
单位：100853北京,解放军总医院风湿科
抗中性粒细胞胞浆抗体(anca)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆蛋白的自身抗体。该抗体被普遍认为是系统性血管炎的标记抗体。间接免疫荧光法(iif)检测anca有3种荧光图谱,胞浆型(c-anca)、核周型(p-anca)和非典型型(a-anca)。为探讨anca与系统性红斑狼疮(sle)的关系及其临床意义,我们采用iif法对63例sle患者血清进行检测。
一、材料与方法
1.对象:sle患者63例,为本科住院患者,年龄12～62岁,平均30岁,病程1个月至25年,平均3.8年。所有患者均符合美国风湿病协会1982年的诊断标准。另选择42例正常健康人作为对照。
2.anca检测:从正常献血员抗凝血中分离出中性粒细胞,用细胞离心涂片机制备抗原片,1000r/min离心4min,无水乙醇4℃固定5min,吹干。标本血清用0.01mol/lpbs1∶10稀释加在抗原片上,37℃孵育30min,pbs洗3次,每次5min,吹干。加1滴羊抗人igg荧光抗体(军事医学科学院提供,用时1∶40稀释)于抗原片上,同上37℃孵育30min,pbs洗3次,吹干。加缓冲甘油封片,荧光显微镜下观察结果。中性粒细胞胞浆出现特异性荧光者为c-anca,细胞核周围出现特异性荧光者为p-anca,不典型荧光着色者为a-anca,胞浆及核周围均无特异荧光染色者为阴性。每例标本均进行2次以上检测证实。
3.抗核抗体(ana)检测:以小鼠肝切片为底物,采用iif。抗dsdna抗体采用放射免疫分析法检测。抗ena抗体采用对流免疫电泳法检测。
4.统计学处理:采用χ2检验。
二、结果
1.42份正常健康人血清均为阴性,63例sle患者血清26例anca阳性(41.3％),其中p-anca15例,a-anca11例。
2.在anca阳性组,浆膜炎及多系统受累的sle患者明显高于阴性组,而肝损害、肺部病变、皮损及心电图异常在两组之间没有差异(见表1)。抗dsdna抗体阳性及中度以上贫血(血红蛋白＜90g/l)的sle患者在anca阳性组明显高于阴性组(见表2)。
表1 anca与sle临床表现的关系[例数(％)]
| 临床表现 | anca阳性(26例) | anca阴性(37例) | χ2值 | p值 |
| 蝶形红斑 | 13(50.0) | 16(43.2) | 0.281 | ＞0.05 |
| 盘状红斑及紫癜 | 19(73.1) | 25(67.6) | 0.220 | ＞0.05 |
| 口腔溃疡 | 11(42.3) | 17(45.9) | 0.082 | ＞0.05 |
| 腹水 | 4(15.4) | 5(13.5) | 0.044 | ＞0.05 |
| 浆膜炎 | 13(50.0) | 6(16.2) | 8.274 | ＜0.01 |
| 心电图异常 | 6(23.1) | 14(37.8) | 1.534 | ＞0.05 |
| 肺部病变 | 4(15.4) | 5(13.5) | 0.044 | ＞0.05 |
| 肝脏损害 | 6(23.1) | 3(8.1) | 2.794 | ＞0.05 |
| 多系统受累 | 14(53.8) | 9(24.3) | 5.741 | ＜0.05 |
表2 anca与sle其它实验室检查的关系[例数(％)]
| 实验室检查 | anca阳性(26例) | anca阴性(37例) | χ2值 | p值 |
| 24h蛋白尿＞0.15g/l | 22(84.6) | 30(81.1) | 0.132 | ＞0.05 |
| 血小板＜100×109/l | 5(19.2) | 8(21.6) | 0.053 | ＞0.05 |
| 白细胞＜4.0×109/l | 10(38.5) | 15(40.5) | 0.028 | ＞0.05 |
| 血红蛋白＜110g/l | 21(80.8) | 22(59.5) | 3.200 | ＞0.05 |
| ＜90g/l | 12(46.2) | 8(21.6) | 4.241 | ＜0.05 |
| 血沉＞20mm/lh | 22(84.6) | 31(83.8) | 0.008 | ＞0.05 |
| ana阳性 | 26(100) | 33(89.2) | 3.000 | ＞0.05 |
| 坑ds-dna抗体阳性 | 10/10 | 8/17(47.1) | 7.941 | ＜0.01 |
| 抗sm/抗阳性 | 5(19.2) | 11(29.7) | 0.888 | ＞0.05 |
| 抗ssa/抗ssb阳性 | 10(38.5) | 20(54.1) | 1.488 | ＞0.05 |
三、讨论
debandt等[1]在11例sle患者血清中检测出1例p-anca,4例a-anca。lawton和lee[2]在46例sle患者中检测出14例p-anca。而我们在63例sle患者中发现15例p-anca,11例a-anca。在sle患者血清中未见有c-anca的报道。这些不同的荧光图型是由多种抗原成分所致。c-anca的主要抗原成分为蛋白酶3(pr3),p-anca的主要抗原成分为髓过氧化物酶(mpo),a-anca的抗原成分目前尚不清楚。afelera等[3]的研究发现,抗中性粒细胞胞浆抗原和核抗原的免疫应答不同,本文结果也未发现ana与anca有相关性。
研究认为,anca能刺激活性氧离子(ros)的释放,引起组织损伤[4]。对比anca阳性和阴性sle患者的临床资料,在anca阳性患者中浆膜炎发生率为50％,而在anca阴性患者中仅为16.2％,二者差异有显著性(p＜0.01)。在anca阳性组,多系统受累(53.8％)及中度以上贫血者(46.2％)均明显 高于anca阴性组(p＜0.05)，提示anca与sle的病情活动有关。egner等[5]也观察到anca在sle发 病或病情复发时升高。有人发现,活动性狼疮肾炎患者血清中anca阳性率明显高于非活动性狼疮肾炎患者。而血清抗dsdna抗体在活动性狼疮肾炎患者血清中也普遍升高。本文结果显示,在anca阳性组抗dsdna抗体阳性率明显高于anca阴性组(p＜0.01)，推测anca可能与活动性狼疮肾炎有关。
参考文献
1 de bandt m,meyer o,haim t,et al. antineutrophil cytoplasmic antibodies in rheumatoid arthritis patients.br j rheumatol,1996,35:38－43.
2 lawton jwm,lee ss. antineutrophil cytoplasmic antibody (anca) in systemic lupus erythematosus (sle).am j kidney dis,1991,2:200.
3 afelera a,sebastiani gd,galeazzi m, et al.antineutrophil cytoplasmic antibodies in synovial fluid and in serum of patients with rheumatoid arthritis and other types of synovitis.rheumatol,1996,23:10－15.
4 ewert bh,jennette jc,falk rj. the pathogenic role of antineutrophil cytoplasmic autoantibodies.am j kidney dis,1991,2:188－195.
5 egner w, chapel hm. titration of antibodies against neutrophil cytoplasmic antigens is useful in monitoring disease activity in systemic vasculitides.clin exp immunol,1990,82:244.
(收稿：1998－08－03修回：1998－12－21)
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