大黄和黄芪治疗SLE样BXSB小鼠的初步探讨

2015-09-30 17:21:11

　　大黄和黄芪治疗sle样bxsb小鼠的初步探讨

　　中华皮肤科杂志 1999年第4期第32卷短篇论著

　　作者：张岚　徐世正　肖伟平　付继成　周心房

　　单位：430060武汉，湖北医科大学附属第一医院皮肤科[张岚（现在湖北省医学科学院皮肤病研究所，430079]；湖北省人民医院(徐世正　肖伟平　付继成　周心房)

　　系统性红斑狼疮（sle）的主要死亡原因之一是狼疮肾炎，目前以皮质类固醇和免疫抑制剂为主要治疗手段，但两者均有严重的不良反应。故有必要探讨新的有效而不良反应较轻的治疗手段。我们应用单味大黄、黄芪和两药混合剂治疗bxsb小鼠，观察相关实验室指标的变化，以了解两药单用或混合应用对鼠sle的治疗作用和对人类sle的应用前景。

　　一、材料和方法

　　(一)材料：

　　1．实验材料：选择2月龄bxsb雄鼠36只，体重18～22g。北京医科大学附属第三医院陈学荣教授惠赠，饲养在本院动物室层流柜中。

　　2．药物：①中药：大黄（rheumpalmatuml）产于甘肃，黄芪（astragalusmongholicusbunge）产于内蒙古。两药均在本实验室自制成煎剂。煎制方法采用传统中药煎制法[1]。配制黄芪煎剂（相当1g/ml生药黄芪），大黄煎剂（相当1g/ml生药大黄），混合煎剂（相当生药黄芪1g/ml，大黄0.5g/ml）置于4℃冰箱中保存备用。②地塞米松（dxm）注射剂：扬州制药厂生产。③环磷酰胺（ctx）注射剂：天津金世化工制药有限公司生产。

　　3．试剂：①考马斯亮蓝：美国fluka公司生产。②标准白蛋白：武汉生物制品研究所免疫室提供。③fitc标记的羊抗鼠igg：武汉生物制品研究所免疫室提供。④0.01mol/l磷酸缓冲液（pbs）。

　　4．仪器设备：精密天平，721分光光度计，水浴箱，荧光显微镜，鲍金7000生化自动分析仪。

　　(二)方法：

　　1．给药方法：bxsb雄鼠36只，随机分成6组，每组6只。第1组：黄芪组；第2组：大黄组；第3组：混合剂组；第4组：地塞米松组；第5组：环磷酰胺组；第6组：空白对照组，给予等量生理盐水灌胃和等量注射用水腹腔注射，每日1次，上述各组连续用药3个月。

　　2．实验室指标检测：尿蛋白含量：用尿蛋白定量考马斯亮蓝染料法检测；血清抗核抗体（ana）：间接免疫荧光法检测；血清尿素氮（bun）和血肌酐（scr）水平：酶法在鲍金生化自动分析仪上检测；肾脏免疫病理及观察：新鲜小鼠肾脏冰冻切片后，直接免疫荧光法观察肾脏免疫沉积情况。

　　二、结果

　　1．尿蛋白含量检测：见表1。5月龄bxsb雄鼠肾功能明显异常，与对照组比较中药能减轻其损害（p＜0.01），且中药各组与地塞米松组和ctx组间差异无显著性0.05）。

　　表1　bxsb小鼠尿蛋白含量、血清ana水平检测结果（6只）

　　组别剂量(g·kg－1·d－1×90d)途径尿蛋白量(mg/l)　血清ana水平

　　±stt值±stt值

　　黄芪组1.8灌胃1492.9±66.722.45＊1.230±0.3163.98＊

　　大黄组0.6灌胃1811.6±654.13.01＊1.178±0.2464.97＊

　　混合组1.7灌胃1542.5±333.34.76＊1.129±0.2963.91＊

　　地塞米松组0.001腹腔注射1645.8±236.66.98＊0.778±0.3012.85＊＊

　　环磷酰胺组0.025腹腔注射1667.0±201.88.76＊1.230±0.2524.89＊

　　空白对照组－－3227.6±655.0－1.899±0.517－

　　注：与空白对照组比较，*p＜0.01,**p＜0.05；各用药组两两比较，差异均无显著性。血清ana水平值为其滴度的对数

　　2．血清ana水平检测：见表1。5月龄bxsb雄鼠免疫系统明显异常，而中药、地塞米松、ctx均显著降低ana水平（p＜0.05），且各用药组间差异无显著性0.05）。

　　3．血清bun和scr水平：见表2。5月龄bxsb雄鼠肾功能损害明显，而中药、地塞米松、ctx均对肾功能有显著改善作用（p＜0.05），且各用药组间差异无显著性0.05）。

　　表2　bxsb小鼠血清尿素氮和血肌酐水平（6只)

　　组别剂量(g·kg－1·d－1×90d)途径尿素氮(mmol/l)血肌酐(umol/l)

　　±stt值±stt值

　　黄芪组1.8灌胃6.42±1.265.2076.19±21.403.65*

　　大黄组0.6灌胃6.83±1.265.62**93.28±11.248.68*

　　混合组1.7灌胃6.96±0.1449.98**68.39±3.0622.53*

　　地塞米松组0.001腹腔注射5.89±0.797.64**96.40±12.547.96*

　　环磷酰胺组0.025腹腔注射5.99±0.867.16**111.30±12.408.96*

　　空白对照组－－8.84±1.35－145.44±17.40－

　　注：与空白对照组比较，*p＜0.01,**p＜0.05；各用药组两两比较，差异均无显著性。

　　4．肾脏免疫病理：6只5月龄bxsb雄鼠肾脏免疫复合物（ic）沉积明显，除黄芪组、ctx组6只中5只阳性外，另4组每组6只均阳性，荧光强度+～+++，但对照组荧光强度+++～++++。肾小球系膜区呈片状荧光，毛细血管壁呈点线状荧光，其荧光强度和累及范围高于用药组。说明5月龄bxsb小鼠肾组织呈明显的免疫复合物性肾炎，而药物在一定程度上减轻肾组织ic沉积。且各用药组间荧光强度经秩和检验差异无显著性（p＞0.05）。

　　三、讨论

　　国外学者已用mrl/lpr和nzb/nzwf1狼疮鼠模型[2]研究了ctx、皮质类固醇对sle的治疗效果，证实能显著减少tnf-α的量和il-1βmrna水平而改善肾损害。也有报道[3]ctx用于人类肾炎的治疗，疗效明显。已证实[4，5]，大黄、黄芪对机体免疫调节具有双向性，大剂量抑制机体免疫功能，小剂量则增强机体免疫功能。基于上述研究，我们选用大黄、黄芪及其混合剂治疗以免疫调节异常为发病原因的sle疾病。本实验提示：中药大黄、黄芪在一定条件下，可改善sle模型bxsb小鼠的实验室指标，同时肾脏免疫病理结果显示5月龄bxsb小鼠有明显的免疫复合物沉积导致的肾小球肾炎，说明鼠sle的发病机理可能为免疫调节紊乱所致免疫复合物形成。

　　参考文献

　　1 王景先.影响汤剂药物有效成分诸因素探析.北京中医,1995，2:38－39.

　　2 kiberd ba, yong id. modulation of glomerular structure and function in murine lupus nephritis by methylprednisolone and cyclophosphamide. j lab med, 1994,124:496－ 503.

　　3 尹广,黎磊石.大剂量环磷酰胺静脉注射治疗狼疮肾炎.中华肾脏病杂志,1994,10:310－313.

　　4 张京玲,胡萍,白凤菊,等.大承气汤及大黄对小鼠体液免疫功能影响的初探.中国实验临床免疫学杂志,1996,8:32－35.

　　5 邵启祥,徐苏红,夏圣，等.黄芪对小鼠体液免疫功能的调节作用.中国实验临床免疫学杂志，1996，8:48－50.

　　收稿：1998－08－04修回：1999－03－08