Fas抗原及Fas配体在红斑狼疮患者皮损中的表达

2015-09-30 17:23:37

　　fas抗原及fas配体在红斑狼疮患者皮损中的表达

　　中华皮肤科杂志 1999年第1期第32卷论　著

　　作者：王秀丽　徐世正　熊腊元　周慕先　何萍

　　单位：王秀丽　徐世正　熊腊元　周慕先　何萍（430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院皮肤科）

　　关键词：红斑狼疮；系统性；红斑狼疮；盘状；角蛋白细胞；fas

　　【摘要】　目的　研究fas抗原及fas配体(fas-l)在红斑狼疮皮损中的表达情况。方法　应用免疫组化技术检测25例系统性红斑狼疮(sle)及14例盘状红斑狼疮(dle)不同病程的皮损中fas抗原及fas-l的表达。结果　sle及dle早期皮损角朊细胞fas抗原表达强度显著高于正常皮肤(p＜ 0.01)，与病程呈负相关(p＜ 0.05)，且真皮中单一核细胞亦有fas抗原表达；红斑狼疮患者皮损及正常皮肤的角朊细胞均不表达fas-l，仅在早期皮损真皮内单一核细胞表达fas-l。结论　fas系统在角朊细胞及真皮异常表达可能与红斑狼疮皮损发生、发展有关。

　　expression of fas antigen and fas-ligand in skin lesions of patients with lupus erythematosus

　　wang xiuli, xu shizheng, xiong layuan,et al.department of dermatology,first affiliated hospital,hubei medical university,wuhan 430060

　　【abstract】　objective　 to investigate the expression of fas antigen and fas ligand (fas-l) protein in the skin lesions of patients with lupus erythematosus.methods　an immunohistochemical technique was performed for detecting fas antigen and fas-l expression in the skin lesions of 25 cases of systemic lupus erythematosus (sle) and 14 cases of discoid lupus erythematosus (dle).results　the positive fas stains were observed in keratinocytes of early skin lesions of both dle and sle, and were significantly stronger than those of normal skin (p＜ 0.01), and the expression was negatively related to the course of the disease (p＜ 0.05). positive fas stains were also found in mononuclear cells(mncs) of dermis. however,fas-l was not expressed in keratinocytes in both skin lesions and normal skin of dle and sle, only existed in mncs of dermis in early stage lesions.conclusion　the abnormal expression of fas and fas-l in keratinocytes and dermal mncs might be related to the occurrence and development of lupus skin lesions in both dle and sle.

　　【key words】 lupus erythematosus,systemic lupus erythematosus, discoid keratinocytes fas

　　fas抗原又称apo-1或cd95分子，它是由fas基因编码的具有诱导细胞凋亡能力的一种细胞表面ⅰ型膜蛋白，fas配体(fas-l)是另一种细胞表面分子，属于ⅱ型膜蛋白，它是fas抗原的天然配体，fas抗原与fas-l组成fas系统，fas-l结合fas抗原后，fas抗原向细胞内传导凋亡信号，在数小时内通过细胞凋亡途径使靶细胞死亡[1]。我们对红斑狼疮皮损表皮细胞的凋亡进行了初步研究，发现其凋亡细胞异常增多[2]。为进一步研究这一现象发生的有关因素，我们采用链霉亲和素－生物素化过氧化物酶技术对25例系统性红斑狼疮(sle)及14例盘状红斑狼疮(dle)不同病程的皮损进行了fas抗原及fas-l表达的研究。

　　材料和方法

　　一、材料

　　1.病例：全部sle及dle皮损标本均来源于我科1995年1月至1998年8月临床资料保存完整的石蜡包埋组织。sle符合美国风湿病协会1982年修订的分类标准。25例sle中男3例、女22例，平均年龄29.86岁，均为红斑鳞屑性皮损。病程在1～6个月者(早期皮损)9例，6个月以上者(晚期皮损)16例。14例dle中男5例、女9例，平均年龄37.83岁，病程在1至6个月者4例，皮损为浸润性红斑，6个月以上者10例，皮损为典型的盘状红斑。7例正常对照标本来源于皮肤外伤周围的正常皮肤。　　2.试剂：兔抗人fas及fas-l多克隆抗体为美国santa cruz公司产品，链霉亲合素－生物素化过氧化物酶复合物免疫组化试剂盒(简称sabc试剂盒)为武汉博士德生物工程公司产品，防脱片剂apes为sigma公司产品。

　　二、方法

　　1.免疫组化染色方法：切取5μm厚石蜡切片，常规脱蜡至水，3％过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，10％羊血清孵育，然后分别滴加fas抗原及fas-l多克隆抗体，4℃过夜，先后滴加生物素化二抗及sabc复合物。上述每步骤前均用pbs充分浸洗。最后dab显色，苏木素轻度复染，脱水、透明、封片。每次实验均用已知阳性切片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。

　　2.结果判断：角朊细胞和单一核细胞(mncs)的细胞膜及细胞浆呈黄色或棕黄色颗粒状物质沉着者为fas抗原或fas-l阳性表达。判断fas抗原在表皮的表达情况时，每张切片在高倍镜下(×40)随机选择5个视野，计数每个视野下表达fas抗原的角朊细胞数，计算其平均值，按其表达情况分为4组：①无任何表皮细胞着色者为阴性(－)；②仅有＜ 25％表皮细胞明显着色者为弱阳性(＋)；③25％～50％表皮细胞明显着色者为阳性()；④ ＞50％表皮细胞着色者为强阳性()。

　　从红斑狼疮皮损表皮及对照组表皮中随机选择40个表达fas抗原的角朊细胞，采用tjty-300型全自动图象分析系统对其细胞染色面积及积分光密度进行定量分析。

　　3.统计分析方法：对红斑狼疮皮损及正常皮肤角朊细胞fas抗原表达强度图象分析所得到的定量结果采用sas软件包进行t检验。

　　结　　果

　　(一)fas抗原表达：正常人表皮颗粒层细胞呈散在的阳性表达(＋)(图1)。25例sle及14例dle皮损中棘细胞层及颗粒层细胞广泛表达fas抗原(＋～)(图2)，尤其是早期皮损，7/9例sle和4/4例dle中均为强阳性表达fas抗原(表1)。经图象分析所得到的fas染色定量检测结果，即染色面积及积分光密度，在红斑狼疮与正常对照之间有着极显著性差异(p＜0.01)。另外，红斑狼疮皮损真皮内mncs亦表达fas抗原(图3)，其表达fas抗原的mncs数量与角朊细胞表达fas抗原的强度无关。因mncs表达fas抗原细胞数较少，未作统计学分析。

　　图1　正常人皮肤颗粒层细胞阳性表达fas抗原（×20）

　　图2　红斑狼疮早期皮损中角朊细胞fas抗原表达（×40）

　　图3　红斑狼疮患者皮损真皮内mncs fas抗原表达（×40）

　　表1　fas抗原及fas-l在红斑狼疮皮损角朊细胞中的表达

　　病种病程例数fasfas-l

　　sle早期（〈6个月）900270

　　晚期（〉6个月）16010600

　　dle早期（〈6个月）400040

　　晚期（〉6个月）1007300

　　对照组-707000

　　(二)fas-l表达：正常人表皮及红斑狼疮表皮均不表达fas-l。9例sle早期皮损中7例其真皮内mncs表达fas-l，4例dle早期皮损真皮内mncs均出现fas-l阳性着色细胞；而晚期皮损mncs则几乎见不到fas-l阳性着色细胞(表1)。

　　讨　论

　　已知fas抗原可以在各种细胞中表达，包括在淋巴细胞及非淋巴细胞表面表达[3]，而fas-l主要表达于活化的t淋巴细胞[4]。myslor等[5]报道，fas抗原在sle外周血b淋巴细胞和cd4＋及cd8＋t淋巴细胞中表达均高于正常水平，尤其是cd8＋t淋巴细胞表达极为显著。另有文献报道苔藓样药疹、多形红斑、接触性皮炎、大疱性类天疱疮、寻常性天疱疮和带状疱疹皮损的表皮细胞中fas表达增强[6]。而在sle皮损中的表达情况尚未见报道。同时由于fas被认为是调节免疫和病理的重要因素[1]，且皮肤损害是红斑狼疮的一个突出表现，故我们选择红斑狼疮皮损作为fas及fas-l的研究对象。

　　本结果显示25例sle及14例dle皮损角朊细胞表达fas抗原的强度、阳性着色细胞染色面积及积分光密度均明显高于正常对照组(p＜ 0.01)，且早期sle及dle皮损角朊细胞表达fas抗原的强度又明显高于晚期sle及dle皮损，说明红斑狼疮皮损角朊细胞fas抗原的表达不仅明显增强，而且与病程呈负相关；另外，红斑狼疮患者皮损真皮内mncs表达fas抗原，而且早期皮损真皮内mncs亦表达fas-l。故推测fas与fas-l系统在角朊细胞及mncs的异常表达，可能是导致红斑狼疮皮损细胞凋亡的重要因素之一。

　　参　考　文　献

　　[1] nagata s, golstein p. the fas death factor. science, 1995,267:1449-1456.

　　[2] 王秀丽, 徐世正, 熊腊元. 红斑狼疮患者皮损中角朊细胞凋亡的初步研究. 中华皮肤科杂志, 1998,31:319-320.

　　[3] itoh n, yonehara s, ishii a, et al. the polypeptide encoded by the cdna for human cell surface antigen fas can mediate apoptosis. cell, 1991,66:233-243.

　　[4] suda t, takahashi t, golstein p, et al. molecular cloning and expression of the fas ligand, a novel member of the tumor necrosis factor family. cell, 1993,75:1169-1178.

　　[5] myslor e, bini p, drappa j, et al. the apoptosis-1/fas protein in human systemic lupus erythematosus. j clin invest, 1994,93:1029-1034.

　　[6] sayama k, yonehara s, watanabe y, et al. expression of fas antigen on keratinocytes in vivo and induction of apoptosis in cultured keratinocytes. j clin invest, 1994,103:330-334.

　　(收稿：1998－02－13　　修回：1998－10－13）