确炎舒松a对瘢痕疙瘩胶原代谢的影响
中华皮肤科杂志 1998年第6期第31卷 论著摘要
作者：张英 吴延芳 匡瑞霞
单位：250013 济南市中心医院整形外科(张英)；青岛市皮肤病研究所(吴延芳 匡瑞霞)
肾上腺皮质激素在治疗瘢痕疙瘩中取得了显著疗效,但对其作用机理的看法并不一致。我们选用确炎舒松a(ta)瘢痕组织内注射治疗4个月,手术切取治疗前后新鲜瘢痕组织,测定羟脯氨酸含量及ⅰ、ⅲ型胶原蛋白含量,同时观察其形态学变化,以探讨ta对瘢痕疙瘩胶原代谢影响的机制。
一、材料和方法
(一)病例：瘢痕疙瘩患者8例，面颊1例、前胸2例、背1例、耳垂3例、下腹1例；男4例，女4例；年龄27～42岁，平均34.5岁；病程5个月至15年，平均7.8年；正常对照组取自做其他整形手术时切除的正常皮肤(非瘢痕疙瘩患者)，共7例，面颊1例、前胸5例、背1例；男3例，女4例；年龄24～45岁，平均34.5岁。
(二)主要试剂：
1.ta注射液：选用2％利多卡因作为稀释液，每次注射时，抽取1ml ta溶液(10mg)与2ml 2％利多卡因(40mg)混匀配制成浓度为20％ ta注射液。75％酒精消毒皮损后，依次从皮损边缘处边进针边将药物缓慢注入瘢痕组织内，直到局部皮肤呈白色。若3ml药物用完后仍有未注射的皮损，考虑下次治疗。
2.每例患者每处皮损平均半月治疗1次，4次一个疗程，共治疗2个疗程(ta由上海第九制药厂提供)。
(三)方法：无菌条件下，切取新鲜皮损组织，去净周围结缔组织，进行预处理。
1.羟脯氨酸含量测定： 将经乙醇脱水、氯仿脱脂的组织置入盐酸水解，加0.2mol/l氯胺-t氧化，加甲苯，1000r/min离心3分，取水层液煮沸，冷却，加甲苯振荡，吸取2ml甲苯层溶液置一干净试管，加艾氏溶液氧化，溶液将变成不同深度紫红色，用722紫外分光光度计测a560值。
2.ⅰ、ⅲ 型可溶性胶原蛋白测定：取出－20℃保存组织用0.5mol/l冰醋酸、胃蛋白酶提取，上清液加nacl溶液(0.9mol/l)盐析，沉淀置透析袋，用0.05mol/l冰醋酸透析，真空冷冻干燥，称重，溶于样品缓冲液，－20℃保存。ⅰ 型胶原蛋白提取：将上清液加入nacl溶液(2.6mol/l)，离心，收集沉淀，称重，计算出相对浓度。ⅲ型胶原蛋白提取：取ⅰ、ⅲ 型混合物悬浮于nacl溶液(1.7mol/l)，0.05mol/l tris缓冲液(ph7.5)，离心，沉淀即ⅲ型胶原，称重。
4.组织形态学观察：新鲜组织分别置10％中性福尔马林液固定24小时和6％戊二醛磷酸缓冲液固定过夜，常规包埋、染色、切片、光镜及透射电镜观察。
二、结果
1.取10μg/ml l-4-羟脯氨酸标准溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml，按上述方法测得a560值分别为：0.039、0.289、0.339、0.66。求得直线回归方程：y=－0.052±0.096x，y：a值，x：羟脯氨酸含量(μg)。
2.ta治疗前羟脯氨酸含量为13.61±2.4μg(±s，下同)，对照组5.2±1.97μg，两组经t检验，t=7.34，p＜ 0.01，说明瘢痕疙瘩组织羟脯氨酸含量明显增高；治疗后为6.31±2.4μg，与治疗前相比，t=5.88，p＜ 0.01；与对照组相比，t=0.95,p ＞0.05，说明经一个疗程治疗，羟脯氨酸含量降低。
3.ta治疗前瘢痕组织ⅰ、ⅲ 型胶原蛋白相对含量分别为(91.6±2.1)％、(7.8±3.4)％，治疗后分别为(80.3±0.72)％、(4.5±1.41)％，治疗前后比较均有高度显著性差异：ⅰ 型胶原蛋白：t=13.5,p＜ 0.01；ⅲ 型胶原蛋白：t=2.39,p＜ 0.05，表明ta能降低瘢痕组织胶原蛋白含量，以降低ⅰ型为主。
4.ta治疗前ⅰ/ⅲ 型胶原比值为：12.6±2.04，对照组比值为4.07±1.43，两组经t检验，t=8.72,p＜ 0.01。说明瘢痕组织ⅰ/ⅲ 型胶原比值明显增高；治疗后ⅰ/ⅲ比值为11.33±2.07，与治疗前相比，t=2.04,p ＞0.05，，表明ⅰ/ⅲ胶原比值经1个疗程治疗有降低趋势，但无统计学意义。
5.光镜显示瘢痕疙瘩组织表皮突减少，甚至消失，真皮层胶原纤维大量增生，呈旋涡状，玻璃样变性。成纤维细胞数目增多且排列不规律。早期病变有丰富毛细血管及炎细胞浸润，长期病变真皮乳头层几乎消失，血管大多闭塞。电镜下瘢痕组织成纤维细胞形态肥大，胞质内充满大量粗面内质网，高尔基体发达，核变大，染色质不均匀。ta治疗后成纤维细胞胞质内细胞器开始萎缩，微丝增多，纤维细胞数目相对增多。
三、讨论
瘢痕疙瘩胶原蛋白主要由ⅰ、ⅲ 型组成，正常皮肤ⅰ、ⅲ 型胶原含量比约4∶1，以ⅰ 型含量为主。本实验发现治疗后ⅰ、ⅲ 型胶原蛋白含量明显降低，说明激素因影响胶原蛋白代谢，使胶原含量降低达到治疗目的。至于激素是如何控制胶原蛋白含量，是对基因转录水平进行调控还是对蛋白质进行降解，还有待进一步研究。
本课题由山东省卫生厅资助，鲁卫科教字(1996)第12号
(收稿：1997-12-01 修回：1998-06-01)
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