性罪错妇女生殖道人乳头瘤病毒检测及型别分析

2015-09-30 17:25:45

中华皮肤科杂志 1998年第3期第31卷论著摘要

作者：张丽芳　郑飞云　林巧爱　朱雪琼　陈素华　包其郁

单位：325003 温州医学院微生物学教研室(张丽芳　林巧爱　包其郁)；温州医学院附属第一医院妇产科(郑飞云)；温州医学院附属第二医院妇产科(朱雪琼　陈素华)

　　为了解人乳头瘤病毒(hpv)及其型别在本地区高危人群中的流行情况，我们采用hpv的共同引物(general primer,gp)对41例性罪错妇女、46例对照组宫颈标本进行聚合酶链反应(pcr)检测，再用型特异性引物(sp)6、11、16、18对gp-hpv阳性标本进行扩增分型，现报道如下。

　　一、材料和方法

　　1.标本来源：于1996年12月，随机选择温州市妇女劳教所性罪错妇女41例，年龄18～40岁，刮取宫颈脱落细胞标本，共41份；同时随机选择本院附属二院妇科门诊要求体检的育龄妇女46例，作为正常人

表1　各组生殖道标本hpv及其型别检出结果

组别	例数	gp-hpv(+)	各型hpv检出数	多重型别检出数 (二型以上)
例数	%	6	11	16	18	其它
性罪错组	41	26	63.4	5	7	7	14	6	8
正常人群组	46	3	6.5	0	0	1	0	2	0

　　χ²=31.58，p＜0.01

表2　性罪错妇女性伴数与生殖道hpv及其型别的检出关系

性伴数	例数	gp-hpv(+)	各型hpv检出数	多重型别检出数 (二型以上)
例数	%	6	11	16	18	其它
2～10	15	6	40.0	0	4	1	1	2	1
11～30	15	10	66.7	2	2	4	5	2	5
31～	11	10	90.9	3	1	2	8	2	2

　　χ²=7.20，p＜0.05 群对照。

　　2.标本处理：脱落细胞标本用ph7.0、66mmol/l的pbs缓冲液洗涤、离心，经蛋白酶k 55℃ 作用3小时后，于95℃ 10分钟灭活，收集离心后上清液，-20℃保存备用，作为pcr模板。

　　3.引物合成：本研究hpv引物由美国loyola大学医学研究中心周健博士惠赠，gp扩增139-14 5bp，序列为：5′-tttgttactgtggtagatac-3′、5′-ga

　　aaaataaactgtaaatca-3 ′；sp6扩增28 0bp，序列为：5′-tttgttactgtggtagatac-3′、5′-gaaaaataaactgtaaatca -3′；sp11扩增3 60bp，序列为：5′-ggaatacatgcgccatgtgc-3′、5′-cgagcagacgtccgtcctcg-3′；sp 16扩增 152bp，序列为：5′-tgctagtgcttatgcagcaa-3′、5′-atttactgcaacattggtac-3′；s p1 8扩增216bp，序列为：5′-aaggatgctgcaccggctga-3′，5′-cacgcacacgcttggcaggt-3 ′。

　　4.pcr操作：每50μl反应体系中，含引物50μmol/l，dntp 200μmol/l，taq酶1.5u，模板用量10μl；反应步骤为92℃ 60秒变性，55℃ 120秒复性，72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外反射仪下观察记录。

　　5.数据统计：各组别hpv检出率的比较，采用χ²检验。

　　二、结果

　　1.pcr扩增产物分析：gp、sp6、sp11、sp16、sp18五组引物均能准确扩增出相应的扩增产物，反应结果清晰易辨，见图1。

　　2.各组标本hpv及型别阳性检出率见表1。性罪错组hpv阳性检出率 (63.4%)较对照组(6.5%)有显著性差异(χ²=31.58，p＜0.01)；hpv 型别以18型检出为多见，占hpv阳性的53.8%(14/26)；二型以上的多重型别检出率为30.8% (8/26)，其中hpv16+18、6+18、6+16+18、6+11+16+18各1例，11+16、6+11+18各2例。

　　3.性伴数与hpv及其型别的检出关系见表2。随着性伴人数(据受检者主诉)

　　1、3、5、7、9分别为sp6 、sp11、sp18、sp16、gp五组引物扩增的hpv阳性对照；2、4、6、8、10分别为相应引物扩增的hpv阳性标本；11、12为gp引物扩增的阴性标本

图1 　pcr扩增产物分析

　　的增加，hpv的阳性检出率呈上升趋势，经检验有显著性差异(χ²=7.20，p＜0.05)；尤以hpv18的阳性检出率随性伴数增高而增高(χ²=12.32，p[ wtbz ＜0.01)。

　　三、讨论

　　近年来研究已表明，hpv是std病原之一，其某些型别与宫颈上皮的不典型增生及宫颈癌发生发展相关。通常认为hpv16和18是致癌的高危型别，而hpv6、11则是致癌的低危型别。国外学者对hpv与性传播的相关性作过许多研究，发现hpv是妇女生殖道最常见的std病原。baken 等^［1］报道采用pcr方法检测hpv，在std门诊女性患者中阳性检出率高达72%。本文性罪错妇女宫颈hpv的阳性检出率为63.4%，高危型别的检出占hpv阳性的80.5%(21/26)，尤以hpv18型的检出为高，占其中的53.8%(14/26)。表明性罪错人群hpv 感染以高危型别、尤其18型为主。

　　多数研究表明hpv感染与性伴数关系最为密切^［1～3］。evander 等^［2］对276例妇女进行2年的追踪调查，发现hpv16是感染的主要型别。franco等^［3］对718例无症状妇女进行hpv感染研究后提出，hpv的感染与多个性伴及初次性交年龄相关，尤其高危型别感染与之具显著相关性。本文性罪错妇女中，hpv的阳性检出率较对照组有显著性差异(p＜0.01)；且随性伴人数增加而增高。提示hpv感染与性传播有关。

　　参考文献

　　1 baken la, koutsky la, kuypers j, et al. genital human pa pillomavirus infection among male and female sex partners: prevalence and typesp ecific concordance. j infect dis, 1995,171∶429-432.

　　2 evander m, edlund k, gustafsson a, et al. human papillomavirus infectio n is tra nsient in young woman: a population-based cohort study. j infect dis, 1995,171 ∶1026-1030.

　　3 franco el, villa ll, ruiz a, et al. transmission of cervical human papi llomavir us infection by sexual activity: differences between low and high oncogenic risk types. j infect dis, 1995,172∶756-763.