银屑病患者外周血淋巴细胞分析

2015-09-30 17:26:34

　　银屑病患者外周血淋巴细胞分析

　　中华皮肤科杂志 1998年第2期第31卷论著摘要

　　作者：刘华昌　李冠勇　尹格平　姜磊

　　单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(刘华昌　李冠勇)，流式细胞研究室(尹格平)，免疫科(姜磊)

　　我们对银屑病患者外周血t细胞活化、t细胞亚群、b细胞及免疫球蛋白(ig)进行了研究，旨在进一步了解免疫机理在银屑病发病中的作用。

　　一、资料和方法

　　1.观察对象：56例寻常型银屑病患者，均为我院门诊及住院患者，男30例，女26例；年龄16～65岁，平均36岁；病程10天至40年；其中进行期33例，静止期23例；泛发性32例，局限性24例。另选健康对照者51例，男28例，女23例；年龄17～64岁，平

　　附表　银屑病患者外周血t细胞亚群、hla-dr+细胞及b细胞检测结果(±s，%)

　　组　别例数cd3+cd4+cd8+cd3+/hla-dr+cd19+

　　健康对照组5164.35±4.7441.42±4.9323.88±2.521.53±0.5716.31±1.81

　　银屑病组5665.65±5.3240.85±5.6326.52±3.0512.14±1.7515.83±1.96

　　t值-1.32940.55484.8537**42.9381**1.3122

　　进行期3365.82±4.6339.51±5.0327.33±2.9814.36±1.4915.89±1.84

　　静止期2365.48±4.8941.19±4.9125.71±2.679.92±1.3815.77±1.67

　　t值-0.26421.24162.0870*11.3035**0.2492

　　泛发性3266.05±5.0139.87±4.8327.38±2.8115.52±1.4115.91±1.69

　　局限性2465.28±4.7840.83±5.0125.66±2.928.76±1.4315.75±1.86

　　t值-0.58030.72442.2291*17.6455**0.3358

　　*p＜0.05，**p＜0.01均35岁。两组均排除系统性疾病史。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。

　　2.实验方法：

　　(1)样本采集：晨起采集静脉血5ml，3ml用于流式细胞仪检测，2ml用于免疫球蛋白检测。

　　(2)流式细胞仪检测t细胞活化(hla-dr表达)、t细胞亚群及b细胞：试剂：①t细胞亚群：异硫氰酸荧光素(fitc)、r-藻红蛋白(pe)和r-藻红蛋白-花青苷5(pe-cy5)三色标记的鼠抗人单抗：cd4(抗辅助/诱导性t细胞)-fitc/cd8(抑制/细胞毒性t细胞)-pe/cd3(全t细胞)-pe-cy5及上述三种荧光标记阴性对照羊抗鼠igg１。②hla-dr+t细胞：cd3-fitc/hla-dr-pe以及双色标记的阴性对照羊抗鼠igg１。③b细胞：cd19-fitc及阴性对照羊抗鼠igg１。流式细胞仪：美国becton-dickinson公司产facscan型。上机后收集20　000个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在macintosh650计算机上用cell qutst plot软件(bd公司产)分析数据，由hp1200c/ps打印结果。

　　(3)免疫球蛋白检测：采用法国产sanofei qm-300型特定蛋白测定仪，用激光速率免疫比浊法。

　　3.统计学处理：采用t检验、t′检验。

　　二、结果

　　1.银屑病患者t细胞亚群检测结果：患者外周血cd8+细胞百分率较对照组显著增高(p＜0.01)；进行期患者cd8+细胞百分率显著高于静止期患者(p＜0.05)；泛发性患者cd8+细胞百分率显著高于局限性患者(p＜0.05)；患者cd3+、cd4+细胞百分率与对照组无显著性差异(p＞0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者cd3+、cd4+细胞百分率亦无显著性差异(p均＞0.05)。

　　2.银屑病患者cd3+/hla-dr+细胞百分率较对照组显著增高(p＜0.01)；进行期患者cd3+/hla-dr+细胞百分率明显高于静止期患者(p＜0.01)；泛发性患者cd3+/hla-dr+细胞百分率明显高于局限性患者(p＜0.01)。

　　3.银屑病患者b细胞检测结果：患者cd19+细胞百分率与对照组无显著性差异(p＞0.05)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者cd19+细胞百分率亦无显著性差异(p＞0.05)。详细结果见附表。

　　4.银屑病患者igg、iga、igm水平与对照组无显著性差异(p＞0.05，具体数值略)；进行期与静止期、泛发性与局限性患者igg、iga、igm水平亦无显著性差异(p＞0.05)。

　　三、讨论

　　银屑病患者外周血t淋巴细胞亚群的研究结果尚存争论。已有研究报道银屑病患者外周血cd3+、cd4+及cd8+细胞均减少［1］，horrocks［2］等报道银屑病患者外周血cd3+、cd4+细胞数量或百分率均无显著异常。我们的结果显示银屑病患者外周血cd3+、cd4+细胞百分率无明显变化，但cd8+细胞却明显增多，且与病情有关，与jeffes［3］等的研究结果一致。淋巴细胞粘附于血管内皮是其通过微血管到达炎性部位的重要步骤。已有研究发现cd4+细胞粘附于银屑病真皮微血管内皮的能力是cd8+细胞的4倍［4］。

　　众多资料显示，银屑病皮损内浸润的淋巴细胞主要是hla-dr+细胞，提示这些细胞处于活化状态［3］。但这些细胞是进入皮损之前就已活化，还是进入皮损之后才开始活化尚不清楚［3］。我们的研究结果显示，银屑病患者外周血hla-dr+t细胞明显增多，与kasteler［5］等的结果一致，提示淋巴细胞在进入皮损前已经活化。

　　参　考　文　献

　　1 borroni g, brazzelli v, fietta a, et al. effects of medium-term puva therapy on peripheral t-lymphocyte subsets in psoriatic patients. acta dermatol venereol(stockh), 1989,suppl 146∶125-129.

　　2 horrocks c, duncan ji, swell hf, et al. differential effects of cyclosporine a on langerhans cells and regulatory t-cell populations in severe psoriasis: an immunohistochemical and flow cytometric analysis. j autoimmun, 1990,3∶559-563.

　　3 jeffes ⅲewb, lee gc, said s, et al. elevated numbers of proliferating mononuclear cells in the peripheral blood of psoriatic patient correlate with disease severity. j invest dermatol, 1995,105∶733-738.

　　4 chin yh, falanga v, taylor jr, et al. adherence of human helper/memory t-cell subsets to psoriatic dermal endothelium. j invest dermatol, 1990,94∶413-417.

　　5 kasteler js, petersen mj, vance je, et al. circulating activated t lymphocytes in autoeczematization. arch dermatol, 1992,128∶795-798.

　　(收稿：1997-01-06　　修回：1997-06-17)