银屑病患者皮损中cdk4和p16蛋白表达
中华皮肤科杂志 1998年第2期第31卷 论著摘要
作者：陆前进 卢放根 颜兰香 文海泉 张其亮 张桂英 余桂英 杨竹林
单位：410011 长沙，湖南医科大学附属第二医院皮肤科(陆前进 颜兰香 文海泉 张其亮 张桂英 余桂英)，消化内科(卢放根)，肝胆研究室(杨竹林)
近几年对细胞周期调控研究具有突破性的进展之一是确立了细胞周期素(cyclin)的周期性累积与分解对细胞周期进程的调控作用。cyclin d类似于癌基因，在与周期素依赖性激酶4(cdk4)结合后刺激细胞分裂、增殖。p16蛋白是一种抑癌基因产物，与cyclin d竞争并同cdk４结合，阻止细胞分裂、生长［1，2］。鉴于银屑病与角朊细胞的增殖和分化异常有关，我们采用免疫组化方法研究了cdk４及p16在银屑病患者皮损中的表达。
一、资料和方法
1.标本：16份银屑病患者石蜡标本为我院1994年7月至1995年10月门诊及住院确诊的寻常型银屑病患者皮损，这些患者均为进行期，男9例，女7例；年龄14～58岁；病程2个月至45年。10份正常人皮肤石蜡标本为对照组，其中男6例，女4例；年龄12～50岁。银屑病组与对照组的性别、年龄在统计学上无显著性差异。
2.试剂：cdk４兔抗人单抗、p16兔抗人单抗、生物素化羊抗兔igg、sabc及dab等试剂均为北京中山生物制剂公司产品。
3.方法：免疫组化abc法。皮肤石蜡标本切成4μm厚的薄片，用二甲苯脱蜡，不同浓度的酒精水化，3% h２o２甲醇清除内源性过氧化物酶，自来水彻底清洗后再用pbs清洗；加入cdk４或p16单抗(1∶100)及正常山羊血清(1∶50)，于4℃过夜；pbs洗片；加生物素化羊抗兔igg，于37℃ 30分钟，pbs洗片，加链霉亲和素-抗生物素-生物素-过氧化酶复合物(sabc)37℃ 30分钟，pbs洗片；加dab显色剂显色5～10分钟，自来水冲洗，乙醇固定，晾干，封片，于光学显微镜下观察结果。用pbs代替一抗作阴性对照。
二、结果
1.cdk４：cdk４阳性染色为棕色，定位于细胞浆。银屑病皮损与正常人皮肤角朊细胞阳性表达率分别为75.0%(12/16)、70%(7/10)。经四格表确切概率法检验，无显著性差异(p＞0.05)。但银屑病皮损表皮显色细胞主要为基底细胞，也有部分棘细胞，而正常人皮肤表皮显色细胞仅为基底细胞。
2.p16：p16阳性染色为棕色，主要定位于细胞核，也有少数定位于细胞浆。显色细胞以棘细胞和基底细胞为主，也有少数颗粒细胞。银屑病皮损与正常人皮肤角朊细胞阳性表达率分别为12.5%(2/16)、60%(6/10)，经四格表确切概率法计算p值，有显著性差异(p＜0.01)。
三、讨论
本研究结果显示寻常型银屑病进行期皮损与正常人皮肤表皮角朊细胞cdk４阳性表达率无显著性差异。但前者着色细胞为基底细胞和棘细胞，而后者仅为基底细胞。提示银屑病患者表皮棘细胞明显增厚可能是由于cdk４在棘细胞表达，与cyclin d结合，进而激发g１→s和g２→m期过渡，导致棘细胞分裂、增殖加快。本研究结果还显示正常人皮肤表皮角朊细胞p16表达阳性率明显高于寻常型银屑病患者皮损角朊细胞。银屑病患者皮损角朊细胞p16阳性表达率低，使得cdk４活性失去控制，导致角朊细胞过度分裂、增殖。近年来，有较多的研究报告肿瘤组织p16阳性表达率低，其原因可能为p16基因失活或突变，或者是由于其他因素抑制了p16的表达。至于银屑病角朊细胞p16阳性表达率低的原因，目前尚不清楚，有待于进一步深入研究。
参 考 文 献
1 wu h, wade m, krall l, et al. targeted in vivo expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p21 halts hepatocyte cell-cycle progression, postnatal liver development, and regeneration. genes dev, 1996,10∶245-260.
2 aprelikova o, xion y, liu et. both p16 and p21 families of cdk inhibitors block cdk phophorylation by the cdk activating kinase (cak). j biol chem, 1995,270∶18195-18197.
(收稿：1996-10-14 修回：1997-03-04)
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