p21与p53蛋白在银屑病皮损中的表达
中华皮肤科杂志 1998年第2期第31卷 论著摘要
作者：徐世正 王宏伟 王秀丽 熊腊元
单位：430060 武汉，湖北医科大学附属第一医院皮肤性病科
银屑病是一种皮肤表皮细胞良性增生性疾病，其发病机理仍不清楚。近年来发现ras基因和p53基因与肿瘤细胞的增生有关［1～3］。为探讨ras基因和p53基因与银屑病皮损发生、发展的关系，我们分别对13例银屑病患者皮损内ras基因表达的p21蛋白和p53基因表达的p53蛋白进行了免疫组化研究。
一、病例和方法
1.病例资料：随机选择1996年5～12月门诊就诊的13例进行期斑块状银屑病患者，其中男8例，女5例；年龄19～50岁；病程半年至10年。诊断依据临床表现及组织病理学检查。4例正常人对照来自皮肤外伤患者创口周边外观正常皮肤。
2.试剂：鼠抗人多克隆p21抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国santa cruz公司产品，批号分别为sc817、sc126。链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(sabc)试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。防脱片剂apes为sigma公司产品。
3.免疫组化染色：载玻片先以apes处理，石蜡包埋组织连续制厚4～5μm的切片。切片经脱蜡、水化，再以3% h２o２灭活内源性酶，微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21和p53单抗(稀释度均为1∶50)，4℃过夜，先后滴加生物素化二抗及sabc复合物。以上每一步骤前均以0.1mol/l pbs缓冲液(ph7.4)充分浸洗标本，最后dab显色，苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。每次实验均用已知阳性片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。
4.判断标准：①p21蛋白表达：免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p21蛋白定位于胞浆及胞膜。②p53蛋白表达：染色阳性为棕黄色，不着色为阴性；p53蛋白定位于细胞核。参照garcia［4］的判断方法，确定上述二种蛋白阳性反应细胞的半定量分级：细胞浅棕黄色为1，深棕黄色为2；阳性细胞比例＜20%为1，20%～50%为2，50%以上者为3。上述两项相加等于2～2.9者为弱阳性(+)，3～3.9者为阳性()，≥4者为强阳性()。
二、结果
正常人皮肤表皮中未见p21蛋白和p53蛋白表达。13例银屑病患者皮损中全部出现p21蛋白阳性染色，其中p21阳性4例，强阳性9例，阳性细胞弥漫分布于除角质层外的表皮全层细胞(图1)。但是，13例进行期银屑病患者皮损中p53蛋白表达全部阴性。p21蛋白和p53蛋白的阳性对照均为棕黄色阳性细胞，阴性均无棕黄色着色。
三、讨论
本研究表明，在正常皮肤表皮中p21蛋白和p53蛋白表达均为阴性。而在13例进行期银屑病患者皮损中，p21则全部出现阳性表达，除角质层外，阳性细胞弥漫分布于基底层及棘细胞层。p21过度表达提示其参与银屑病患者皮损角朊细胞增殖、分化的调节，并与银屑病皮损角朊细胞的过度增生及分化密切相关。本研究未
图1 银屑病皮损表皮细胞p21蛋白
强阳性表达(×20)
能检出p53蛋白在银屑病皮损内的表达，而且13例皮损中全部阴性。说明p53蛋白对银屑病皮损的发生影响不大。
参 考 文 献
1 kobayshi h, yasuda h, ohkawara a, et al. enhanced exprssion of ras gene products psoriatic epidermis. arch dermatol res, 1988,280∶259-263.
2 inohara s, kitagawa k, kitano y. coexpression of p21 waf1/cip1 and p53 in sunexposed normal epidermis, but not neoplastic epidermis. br j dermatol, 1996,135∶717-720.
3 bond ja, blaydes jp, rowson j, et al. mutant p53 rescues human diploid cells from senescence without inhibiting the induction of sdi1/waf1. cancer res, 1995,55∶2404-2409.
4 garcia rl, coltrera md, gown aw. analysis of proliferative grade using anti pcna/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues: comparison with flow cytometric analysis. am j pathol, 1989,134∶733.
(收稿：1997-04-17 修回：1997-08-29)
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