系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中热休克蛋白70表达

2015-09-30 17:27:21

中华皮肤科杂志 1998年第1期第31卷论著摘要

作者：陈翔文海泉张其亮

单位：410011 长沙，湖南医科大学附属第二医院皮肤科

　　国外研究发现狼疮模型小鼠多脏器中有热休克蛋白70(hsp70)表达增高^［１］，sle患者皮损区细胞及外周血单一核细胞(pbmc)中均有hsp70表达增高^{［２，３］}，我们通过检测sle患者pbmc中hsp70表达水平，旨在探讨hsp70在sle发病中的作用及其与疾病活动的相关性。

　　一、病例和方法

　　1.病例：我院门诊和住院sle患者29例，均符合1982年ara诊断标准，男6例，女23例，平均年龄33.0±9.4岁，采集标本时体温均低于38℃。其中活动期21例，平均年龄31.9±9.9岁，非活动期8例，平均年龄36.0±7.8岁。对照组为健康献血员及实验室人员20例，男4例，女16例，平均年龄31.7±8.5岁。

　　2.标本采集：无菌抽取抗凝静脉血4ml，并同时检测sle患者抗dsdna抗体和尿蛋白水平。

　　3.pbmc分离、裂解：用ficoll-hypaque离心法分离pbmc，计算pbmc总数，加入25μl/10⁶个pbmc的悬浮缓冲液［0.1mol/l nacl，0.01mol/ltris·cl(ph7.6)，0.001mol/l edta，100μg/ml pmsf］，再加入等体积的加样缓冲液［0.1mol/l tris·cl(ph6.8)，0.2mol/l dtt，4% sds，0.2%溴酚蓝，20%甘油］，置沸水浴10分钟，4000r/min离心10分钟，置上清液于-20℃备用。

　　4.免疫印迹分析：每样本取50μl经sds-page以分离蛋白质，电转膜(4℃、100ma、14h)后将硝酸纤维膜剪成条带并封闭，加入1∶1000鼠抗hsp70单抗(sigma)，24小时后用pbs洗膜再加入1∶2000碱性磷酸酶标记二抗(sigma)，2小时后pbs洗膜再加入生色底物显色后中止反应。

　　5.统计分析：用成组设计两样本比较秩和检验进行sle组和对照组pbmc中hsp70表达比较分析。用多样本两两比较秩和检验进行活动期sle、非活动期sle、对照组pbmc中hsp70表达水平两两间比较分析。sle组pbmc中hsp70表达与其抗dsdna抗体、尿蛋白水平之间用等级相关分析。

　　二、结果

　　1.分级判断各样本膜上hsp70表达水平：强阳性(++)：显现极明显蛋白带；阳性(+)：显现较明显蛋白带；弱阳性(±)：显现不明显蛋白带；阴性(-)：未显现蛋白带。其判断结果见附表。

　　经统计分析发现sle组pbmc中附表 sle患者及对照组外周血单一核细胞中热休克蛋白70表达水平

分组	例数	表达分级
		++	+	±	-
sle组	29	5	8	12	4
对照组	20	0	0	11	9

　　hsp70表达水平较对照组有显著升高(uc=3.517，p＜0.01)。

　　2.统计结果显示：活动期sle患者pbmc中hsp70表达与对照组比较显著升高(p＜0.01)；非活动期sle患者与对照组比较也显著升高(p＜0.05)；但活动期与非活动期患者pbmc中hsp70表达水平比较无显著性差异(p＞0.05)。

　　3.sle患者dsdna抗体、尿蛋白检测结果发现活动期sle组pbmc中hsp70表达水平与其抗dsdna抗体、尿蛋白水平均无相关性(r分别为-0.03和0.253，p均＞0.05)。非活动期组亦然(r分别为0.296和0.503，p均＞0.05)。

　　三、讨论

　　dhillon等^［３］报道sle患者pbmc中hsp70表达增高。sle患者皮损区^［２］及狼疮小鼠多脏器中^［１］均有hsp70表达增加。本研究发现sle患者pbmc中hsp70表达水平较对照组确有升高(p?.01)，且同时出现于活动期和非活动期sle患者中。结合sle患者体内hsp70基因转录水平^［４］和狼疮小鼠hsp70自身抗体^［５］升高的报道，应考虑到增高表达的hsp70可能作为一种自身抗原参与sle发病。hsp70可参与免疫球蛋白合成和抗原递呈，因此hsp70可能伴随sle患者体内自身抗体合成和自身抗原递呈而表达增加。部分sle患者pbmc中并无hsp70高表达(见附表)，因此认为sle患者发病机理是多因素的，并非全与hsp70增高表达有关。本研究还显示活动期与非活动期sle患者pbmc中hsp70表达水平之间无显著性差异，且表达水平与其抗dsdna抗体、尿蛋白水平比较无显著性相关，而抗dsdna抗体阳性和尿蛋白高水平通常出现于活动期sle患者，是判断sle患者病情活动性的重要实验室指标。

参考文献

　　1 faulds gb, isenberg da, latchman ds, et al. the tissue specific elevation in synthesisof 90kd hsp precedes the onset of disease in lupus prone mrl/lpr mice. j rheumatol,1994,21∶234-238.

　　2 ghoreishi m, katayama i, yokozeki h, et al. analysis of 70kd heat shock protein(hsp70) expression in the lesional skin of le and le related diseases. j dermatol,1993,20∶400-405.

　　3 dhillon vb, mccallum s, norton p, et al. differential heat shock protein over-expression and its clinical relevance in sle. ann rheum dis, 1993,52∶436-442.

　　4 deguchi y, kishimoto s. enhanced expression of heat shock protein gene in peripheral blood mononuclear cells of patients with active sle. ann rheum dis, 1990,49∶893-895.

　　5 faulds g, conroy s, madalo m, et al. increased levels of antibodies to heat shock proteins with increasing age in mrl/lpr mice. br j rheumatol, 1995,34∶610-615.

　　(收稿：1997-07-25 修回：1997-10-21)