角膜保存液中添加两性霉素B可提高抗念珠菌属污染能力

眼内炎是穿透性角膜移植术后一种罕见但严重的并发症,由真菌感染所致者较细菌感染显著增加,从1991年的10%增加至2010年的63%。在美国,几乎所有角膜移植术后真菌感染是由念珠菌属(主要为白色念珠菌,其次为光滑念珠菌)所引起。

Optisol-GS 是美国最常用的角膜保存液,其含有抗生素硫酸庆大霉素和硫酸链霉素,但并不含抗真菌药物。欧洲常用的器官培养液中含有抗真菌药两性霉素B。

为了评估伏立康唑和两性霉素B减少Optisol-GS中白色念珠菌和光滑念珠菌污染的有效性和安全性,来自加利福尼亚大学的Layer等开展了一项研究,其结果于在线发表在5月1日的JAMA Ophthalmology上。

20瓶Optisol-GS(每瓶20ml)被分成2组,每组10瓶,分别添加1×、10×、25×、50×的最低抑菌浓度(1μg/mL)的伏立康唑或0.25×、0.5×、1×、10×最低抑菌浓度的两性霉素B,剩余2瓶未添加作为阳性(加接种物)和阴性(无接种物)对照。

将已知浓度的白色念珠菌和光滑念珠菌混悬液加入每组1-9瓶Optisol-GS中,于2-8℃冷藏。第2、7和14天,分别取出1ml溶液制备一份10μL样本和一份100μL(1:10稀释)样本,并接种于琼脂培养基,于35℃下孵育36小时,计算活的菌落数。

通过将15对供者角膜随机分配至未添加的Optisol-GS或添加抗真菌药的Optisol-GS中进行安全性研究。安全性指标包括第0、7和14天的完整上皮百分比和内皮细胞密度,以及第14天经染色证实的未存活内皮细胞百分比。

在所有添加伏立康唑的Optisol-GS中均观察到白色念珠菌和光滑念珠菌的生长。相比之下,在添加两性霉素B的Optisol-GS中,除了0.25倍和0.5倍MIC两种浓度中光滑念珠菌的存活菌落数分别减少99%和96%外,其余浓度中均未观察到两种真菌的生长。

除了添加10倍MIC两性霉素B的Optisol-GS外(内皮细胞密度下降较对照组更明显),添加抗真菌药物的Optisol-GS组与配对的对照组相比,供者角膜的内皮细胞密度下降、完整上皮百分比和未存活内皮细胞百分比均无差异。

本研究结果证实,在Optisol-GS中添加两性霉素B可能可以显著提高抗念珠菌属污染的能力,后者是角膜移植术后真菌感染的主要病原体。

美国眼库学会医学顾问委员会在最近的一份声明中不推荐在角膜保存液中添加抗真菌药物,部分原因是缺乏足够的有效性和安全性证据。本研究将有助于提供这方面的证据。

虽然研究结果显示低浓度两性霉素B可能是角膜保存液的一种安全有效的添加剂,但仍有必要在更大规模的研究中证实上述研究结果。